ИНГИБИРОВАНИЕ АКТИВНОСТИ ТЕЛОМЕРАЗЫ ПРИ СВЕРХЭКСПРЕССИИ АПОПТОТИЧЕСКОЙ ЭНДОНУКЛЕАЗЫ EndoG В CD4+-Т-КЛЕТКАХ ЧЕЛОВЕКА

Д.А. Васина(1), Д.Д. Жданов(1, 2), кандидат биологических наук,
Е.В. Орлова(3), доктор биологических наук, профессор,
В.С. Орлова(1), доктор биологических наук, профессор,
М.В. Покровская(2), кандидат биологических наук,
С.С. Александрова(2), кандидат биологических наук,
Н.Н. Соколов(2), доктор биологических наук, профессор
1-Российский университет дружбы народов, экологический факультет,
Российская Федерация, 117198, Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 6;
2-Институт биомедицинской химии им. В.Н. Ореховича,
Российская Федерация, 119121, Москва, ул. Погодинская, д. 10, стр. 8;
3-Институт теоретической и экспериментальной биофизики,
Российская Федерация, 142290, Пущино, Московская область, ул. Институтская, д. 3
E-mail: zhdanovdd@mail.ru

Введение. Активность теломеразы регулируется альтернативным сплайсингом мРНК ее каталитической субъединицы hTERT (human Telomerase Reverse Transcriptase). Увеличение количества неактивного сплайс-варианта hTERT ингибирует теломеразную активность. В настоящее время механизм сплайсинга hTERT изучен недостаточно. Известно влияние апоптотических эндонуклеаз на активность теломеразы. Цель работы. Изучение влияния апоптотической эндонуклеазы EndoG на альтернативный сплайсинг hTERT и активность теломеразы в нормальных Т-лимфоцитах человека. Материал и методы. CD4+-Т-лимфоциты человека трансфицировали плазмидой, содержащей ген EndoG pEndoG-GFP, или контрольной плазмидой pGFP. Экспрессию генов EndoG и сплайс-вариантов hTERT проводили методом обратной транскрипции (ОТ) полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени. Содержание белка в клетках оценивали с помощью вестерн-блоттинга. Активность теломеразы определяли по протоколу амплификации теломерных повторов. Результаты. Методом корреляционного анализа установлена взаимосвязь между уровнями экспрессии EndoG и сплайс-вариантов hTERT в CD4+- и СD8+-Т-лимфоцитах 12 здоровых доноров. Сверхэкспрессия EndoG в CD4+-Т-клетках вызывала снижение экспрессии полноразмерного активного варианта hTERT и увеличение экспрессии неактивного сплайс-варианта. Нарушение пропорции сплайс-вариантов hTERT в клетках приводило к значительному снижению теломеразной активности уже через 16 ч после трансфекции. Заключение. Показаны зависимость экспрессии апоптотической эндонуклеазы EndoG и сплайс-вариантов hTERT в Т-лимфоцитах человека, а также способность EndoG осуществлять альтернативный сплайсинг мРНК hTERT и снижать активность теломеразы в CD4+-Т-лимфоцитах человека.
Ключевые слова: 
EndoG, теломераза, hTERT, трансфекция, альтернативный сплайсинг