АНАЛИЗ ВОССТАНОВЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ИОНОТРОПНЫХ ГЛУТАМАТЕРГИЧЕСКИХ РЕЦЕПТОРНЫХ МЕХАНИЗМОВ ПОСЛЕ КРИОСОХРАНЕНИЯ СРЕЗОВ МОЗГА

А.А. Мокрушин (1), доктор биологических наук, С.Е. Боровиков (2)
1-Институт физиологии им. И.П. Павлова РАН, лаборатория регуляции функций нейронов мозга,
Российская Федерация, 199034, Санкт-Петербург, наб. Макарова, 6;
2-Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова,
Российская Федерация, Санкт-Петербург, ул. Лебедева, 6А
Е-mail: mok@inbox.ru

Введение. Проанализирована гипотеза о криосохранении небольших объемов нервной ткани (срезы мозга) без использования традиционных криоконсервантов. Цель исследования. Эффект замораживания (-10°С) и оттаивания до +37°С исследовали, изучая изменения активности глутаматергических ионотропных механизмов: α-амино-3-гидрокси-5-метилизоксалон-4-пропионовой кислоты (АМПА) и N-метил-D-аспартата (НМДА) рецепторов. Изменение содержания воды в срезах определялось в процессе криосохранения. Методы. Эксперименты проведены на срезах обонятельной коры мозга крыс. Жизнеспособность срезов определяли по изменению амплитуд АМПА и НMDA возбуждающих постсинаптических компонентов фокальных потенциалов. Были исследованы эффекты 2 скоростей замораживания/оттаивания: низкой (0,1°C/мин) и высокой (9,0°C/мин). Результаты. Активность АМПА и НМДА-рецепторных механизмов при низкой скорости замораживания/оттаивания восстанавливалась, при высокой – активность АМПА повышалась, а НМДА – блокировалась. Содержание воды в срезах при оттаивании было максимальным при использовании высокой скорости замораживания/оттаивания. Набухание срезов было незначительным при низкой скорости замораживания/оттаивания. Дипептид L-карнозин оказался неэффективен как криопротектант для сохранения и восстановления активности НМДА-рецепторов. Этот пептид предотвращал сильное набухание срезов после криосохранения. Заключение. Криосохранение небольших объемов нервной ткани (срезы мозга) с низкой скоростью (0,1°С/мин) замораживания/оттаивания и глубиной замораживания (-10°С) без использования криопротекторов является оптимальным для криоконсервации и возможного их последующего использования в качестве трансплантатов.
Ключевые слова: 
срезы мозга, замораживание/оттаивание, АМПА, НМДА-рецепторы